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Los microorganismos que avinagran la leche se alimentan principalmente de los azúcares presentes en la leche, como la lactosa. Estos microorganismos, generalmente bacterias del género Acetobacter, utilizan la lactosa como fuente de energía a través de procesos de fermentación.

Durante la fermentación, las bacterias convierten los azúcares de la leche en ácido láctico mediante un proceso metabólico. Esta conversión del azúcar en ácido láctico crea un ambiente ácido que da como resultado el sabor agrio o avinagrado característico de la leche agria.

Además de la lactosa, es posible que los microorganismos también utilicen otros componentes de la leche, como las proteínas y los lípidos, como fuente de nutrientes adicionales. Sin embargo, la lactosa es el principal sustrato utilizado por las bacterias para la fermentación y la producción de ácido láctico en el proceso de avinagrado de la leche.