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Santa María la Antigua del Darién - Fundada en 1510, fue la primera ciudad española en tierra firme del continente americano, aunque actualmente ya no existe.
Panamá Viejo (Ciudad de Panamá) - Fundada el 15 de agosto de 1519 por Pedro Arias Dávila. Esta fue la primera ciudad española en la costa pacífica de las Américas.
Natá de los Caballeros - Fundada el 20 de mayo de 1520 por Pedro Arias Dávila, es una de las ciudades más antiguas en la región del istmo de Panamá.
Nombre de Dios - Fundada en 1510, fue uno de los primeros asentamientos españoles en la costa atlántica del istmo de Panamá.
Portobelo - Fundada en 1597 por Francisco Velarde y Mercado, fue un importante puerto colonial para el comercio de mercancías entre América y España.
Santiago de Veraguas - Fundada en 1637, es una de las ciudades más antiguas del interior del país.
San Francisco de la Montaña - Fundada en 1621, es conocida por su iglesia colonial con impresionantes tallados en madera.
Penonomé - Fundada en 1581, es la capital de la provincia de Coclé y una ciudad con una rica historia colonial.
Parita - Fundada en 1558, es una de las ciudades más antiguas de la provincia de Herrera y conserva una arquitectura colonial distintiva.
La Villa de Los Santos - Fundada el 1 de noviembre de 1569, es famosa por su papel en la historia de la independencia de Panamá de España.
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